347 rostfritt stål kemisk sammansättning Storleken på venöst eller kapillärt blod, specifikt för SARS-CoV-2, T-cellssvar avgör immuniteten mot COVID-19.

Tack för att du besöker Nature.com.Du använder en webbläsarversion med begränsat CSS-stöd.För bästa upplevelse rekommenderar vi att du använder en uppdaterad webbläsare (eller inaktiverar kompatibilitetsläge i Internet Explorer).Dessutom, för att säkerställa löpande support, visar vi webbplatsen utan stilar och JavaScript.
Reglage som visar tre artiklar per bild.Använd bakåt- och nästaknapparna för att flytta genom bilderna, eller skjutkontrollknapparna i slutet för att flytta genom varje bild.

347 rostfritt stål kemisk sammansättning

Rostfritt stål 347 spiralrör kemisk sammansättning

Den kemiska sammansättningen och mekaniska egenskaperna hos spolröret av rostfritt stål 347 är som följer:
- Kol – 0,030 % max
- Krom – 17-19 %
- Nickel – 8-10,5 %
- Mangan – 1% max

Rostfritt stål 347 spiralrör mekaniska egenskaper

Enligt tillverkaren av rostfritt stål 347 coil tube, mekaniska egenskaper för 347 coil tube:
- Draghållfasthet (psi) – 75 000 min
- Sträckstyrka (psi) – 30 000 min
- Förlängning (% i 2″) – 25% min
- Brinell hårdhet (BHN) – 170 max

Tillämpningar och användningar av rostfritt stål 347 spiralrör

• Rostfritt stål 347 spiralrör som används i sockerbruk.
• Rostfritt stål 347 spiralrör som används i gödningsmedel.
• Rostfritt stål 347 spiralrör som används inom industrin.
• Rostfritt stål 347 spiralrör som används i kraftverk.
• Rostfritt stål 347 spiralrör som används i livsmedel och mejeri.
• Rostfritt stål 347 spiralrör som används i olje- och gasanläggningar.
• Rostfritt stål 347 spolrörstillverkare som används inom skeppsbyggnadsindustrin.

SARS-CoV-2-specifika T-celler tros skydda mot infektion och utveckling av COVID-19, men det finns inga direkta bevis för detta.Här jämförde vi helblodsmätningar av SARS-CoV-2-specifika interferon-γ-positiva T-celler med positiva COVID-19 diagnostiska testresultat (PCR och/eller lateralt flöde) inom 6 månader efter Lians blodinsamling.Bland 148 deltagare som donerade venösa blodprover var storleken på SARS-CoV-2-specifika T-cellssvar signifikant högre hos de som förblev skyddade än hos de som var infekterade (P < 0,0001).% risk för infektion, medan hög intensitet minskade denna risk till 5,4 %.Dessa resultat generaliserades till ytterligare 299 deltagare som testade en skalbar kapillärblodanalys som kunde underlätta tillgången till T-cellsimmunitetsdata i populationsskala (14,9 % mot 4,4 %).Således kan mätningen av T-celler specifika för SARS-CoV-2 förutsäga risken för infektion och bör utvärderas när man övervakar individens och befolkningens immunstatus.
Att mäta och förstå immunsvaret på SARS-CoV-2-infektion är viktigt för att utveckla effektiva framtida strategier för att minimera folkhälsan och de ekonomiska effekterna av framtida covid-19-utbrott.Identifiering av immunkorrelat kommer att ge viktig information om en populations mottaglighet för virusinfektion, möjligen tidig varning för toppinläggningar på sjukhus, och även tillåta människor att personligen hantera sin infektionsrisk och risken att infektera andra.Immunövervakning har visat sig vara avgörande för att utvärdera effektiviteten av covid-19-vacciner hos friska och högriskpatienter1,2,3, särskilt i SARS-CoV-24-mutanter, och upptäckten av immunförsvagade kommer att innebära behovet av att stärka immuniteten Vaccineras och förebygga framtida utbrott.
En individs nivå av immunitet mot SARS-CoV-2-infektion beror på flera faktorer: virusmängd vid exponeringstillfället, virusvarianter, ålder, tidigare vaccinations-/infektionsstatus, komorbiditeter, mediciner och viktigast av allt, anti-SARS-CoV-infektion .2 adaptivt immunsvar inträffar vid tidpunkten för exponering för viruset5.Utvärdering av immunsvaret på SARS-CoV-2-infektion och/eller vaccination har fokuserat på serologiska analyser som mäter närvaron av antikroppar specifika för ett strukturellt protein (t.ex. spike glykoprotein).Närvaron eller frånvaron av enbart antikroppar bestämmer dock inte exakt ett skyddande immunsvar, eftersom svaren försvagas avsevärt över tiden6 och neutralisering av SARS-CoV-2-varianter hos tillfrisknande eller dubbelvaccinerade individer Svag aktivitet, vilket kan leda till en stor antal genombrottsinfektioner7.Faktum är att skyddet mot symtomatisk covid-19 orsakat av Omicron-varianten (B.1.1.529) minskade till cirka 10 % efter bara 4–6 månaders mRNA-vaccination, även om skyddet mot allvarlig sjukdom kvarstod >68 % i minst 7 månader8.Att mäta adaptiva minnes-T-cellssvar, som ger långsiktigt skydd mot virusinfektion, är den bästa indikatorn på känslighet för SARS-CoV-2-infektion, och därför en bättre indikation på risken att testa positivt för COVID-199, eftersom specifik T celler kan förhindra infektion.utan serokonvertering10,11.Mätningen av T-cellssvar har dock fått mindre uppmärksamhet på grund av metodologiska svårigheter och logistiska problem med att erhålla och transportera venösa blodprover, särskilt när man genomför stora observationsstudier för att bedöma vaccinets effektivitet och övervaka immunitet.Vaccinerade individer visar dock robust T-cellsaktivitet mot SARS-CoV-2-varianter, vilket potentiellt kompenserar förlusten av antikroppsreaktivitet för att begränsa svårighetsgraden av COVID-1912,13.
Här försökte vi förstå om en enda mätning av SARS-CoV-2 T-cellssvar kunde förutsäga den absoluta risken för SARS-CoV-2-infektion inom 6 månader efter blodprovstagning, oavsett tidigare immunpåverkande faktorer.För att göra T-cellstestet hög genomströmning och applicerbart på större studier, försökte vi även göra testet miniatyriserat så att det kan utföras med ett kapillärt fingersticksblodprov.
Vi mätte cellulära och humorala immunsvar hos friska donatorer med en kombinerad detektion av SARS-CoV-2 T-celler och IgG-antikroppar baserat på helvenöst blod (för deltagaregenskaper, se mars 2022 14. Hos vaccinerade donatorer, SARS-CoV-2- specifika T-cellulära svar bestämdes genom att mäta plasmainterferon-y (IFN-y)-nivåer efter helblodsstimulering med SARS-CoV-2-peptid (som tidigare, ref. 14,15,16,17,18) och IgG-svar associerade med nukleokapsid (N) ökade hos dem som rapporterade en tidigare infektion, även om båda svaren var högre hos tidigare infekterade ovaccinerade donatorer, maximalt i kroppen (Fig. 1a, b). IgG-svar mot spike glykoproteiner (RBD, S1, S2) var högst hos tidigare infekterade vaccinerade donatorer (Figur 1c–e).
ett SARS-CoV-2-specifikt IFN-γ+ T-cellsvar mättes med en venös helblodsanalys och baserade på deltagarnas vaccinationer och tidigare SARS-CoV-2-infektionsstatus (bekräftat med PCR och/eller lateralt flödestest)' Vac + /Inf +' n = 60 (grön), 'Vac + /Inf-' n = 82 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 4 (gul), 'Vac-/Inf-' n = 1 (tillämpas inte).SARS-CoV-2-specifika IgG-bindningsreaktioner riktar sig mot nukleokapsid ("N") (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), spikad receptorbindande domän ("RBD") (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), spiksubenhet 1 ("S1") (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) och toppsubenhet 2 ("S2") (e) mättes med venösa helblodsprov och baserat på deltagarvaccination och tidigare SARS -CoV-2 (bekräftat av PCR och/ eller sidoflödestest) infektionsstatus.'Vac + /Inf +' n = 60 (grön), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 4 (gul).Jämförelser gjordes med Kruskal-Wallis-testet, justerat för flera jämförelser med Dunn-testet.Data visas som diagram (mittlinje vid median, övre gräns vid 75:e percentilen, nedre gräns vid 25:e percentilen) med morrhår vid minimi- och maximivärden.Varje prick representerar en donator.Rådata tillhandahålls i form av rådatafiler.
Efter blodprovstagning ombads deltagarna att självrapportera positiva PCR- och/eller laterala flödestestresultat för COVID-19;om deltagarna testade positivt mellan 1 september 2021 och 29 december 2021 antogs de vara infekterade med Delta (B.1.617.2) variant coronavirus och Omicron (B.1.1.529) till Public Health Wales efter den 29 december 2021, när detta alternativ till oro blir dominerande.Bland 148 utvärderbara donatorer observerade vi en infektionsfrekvens på 26,3 % (39/148) inom 6 månader efter bloddonation, varav 38 fick en andra eller tredje dos av covid-19-vaccinet (infektionsgenombrottet inträffade efter Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) mRNA-vaccin eller AstraZeneca-vaccin (ChAdOx1 nCoV-19));en ovaccinerad donator var också infekterad.Omfattningen av SARS-CoV-2-specifika IFN-γ-positiva T-cellsvar var signifikant lägre hos dem som rapporterade ett positivt diagnostiskt test för COVID-19 än hos oinfekterade donatorer (P < 0,0001; Fig. 2a), främst p.g.a. optimal induktion av T-cellssvar genom vaccination hos vissa deltagare (P = 0,050; kompletterande figur 1).Det fanns ingen korrelation mellan storleken på IFN-γ+ T-cellsvaret och tiden till ett positivt COVID-19-testresultat (kompletterande figur 2).Däremot var varken RBD-, S1-, S2-bindande IgG-svar (figur 2b–d) eller RBD-, S1-neutraliserande antikroppssvar specifika för vildtyps- eller delta SARS-CoV-2 (B.1.617).) (Kompletterande bild 3) kan skilja mellan personer med risk för infektion.Emellertid korrelerade låga N-kopplade IgG-svar mot SARS-CoV-2 med risken för COVID-19-infektion (P = 0,0084; figur 2e);de som testade positivt var 85 % mindre sannolika (P = 0,00035; ELLER 0,15, 95).% KI: 0,047–0,39 (kompletterande figur 4).
Venösa blodprover från friska givare (n = 148) bedömde SARS-CoV-2-specifika IFN-γ+ T-cellsvar (a; ****P < 0,0001) och bindning av Spike-receptorn till den specifika SARS-CoV -2 stimulans.domän ("RBD") (b), spike 1 subenhet ("S1") (c), spike 2 subenhet ("S2") (d), och nukleokapsid ("N") (e; **P = 0,0084 ) .Deltagare som testade positivt för COVID-19 (PCR och/eller lateralt flöde) identifierade;alla infektioner inträffade inom 6 månader efter blodprovtagning.Jämförelser gjordes med användning av ett tvåsidigt Mann-Whitney-test.Data visas som diagram (mittlinje vid median, övre gräns vid 75:e percentilen, nedre gräns vid 25:e percentilen) med morrhår vid minimi- och maximivärden.Varje prick representerar en donator.ns är inte viktigt.Värmekartan f visar Spearmans rangkorrelationer mellan variabler för den angivna datamängden.Jämförelser som inte var statistiskt signifikanta exkluderades från matrisen och markerades med tomma celler.Rådata tillhandahålls i form av rådatafiler.
Den förinställda diagnostiska positiva cutoff-gränsen på 14 ansågs vara för godtycklig för att bedöma risken för återinfektion, så interkvartila intervall fastställdes för att fastställa absoluta riskparametrar.Den statistiska modellen, som endast inkluderade variabler som hade en signifikant effekt på resultaten, visade att storleken på det SARS-CoV-2-specifika IFN-γ+ T-cellsvaret var den viktigaste immunbiomarkören för att bestämma en individs chanser att bli testad för covid.-19 positiva (figur 2f och kompletterande figur 4).Patienter med ett SARS-CoV-2-specifikt IFN-γ+ T-cellsvar i den tredje (194-489 pg/ml IFN-γ) och fjärde (>489 pg/ml IFN-γ) kvartilen 65 % (P = 0,055; ELLER 0,35, 95 % KI: 0,11–1,00) och 90 % (P = 0,0050; ELLER 0,098, 95 % KI: 0,014–0,42) hade fler deltagare.Chansen är liten (tilläggsbild 4).Totalt sett hade deltagare med ett SARS-CoV-2-specifikt T-cellssvar från venöst blod ≤79 pg/mL IFN-γ en 43,2 % risk för genombrottsinfektion efter 6 månader, jämfört med ett svar >489 pg/ml.ml IFN-y hade en infektionsrisk på 5,4 % (tabell 2).
Venös helblodstestning är begränsad i omfattning på grund av behovet av provtagning av phlebotomist.För att öka tillgängligheten av T-cells- och IgG-testning för SARS-CoV-2 har en alternativ metod för kapillärblodprovtagning utvecklats för att låta deltagarna ta blodprover från fingerstick hemma.Så vitt vi vet har det inte förekommit några tidigare rapporter om mätning av antigenspecifik T-cellsfunktion i kapillärblodprover.En stark korrelation har tidigare visats mellan lymfocytantal erhållna med jämförbara kapillär- och venösa blodprover.Dessutom har det rapporterats att helblodsbaserade analyser som mäter SARS-CoV-2-specifika T-cellsvar endast använder 320 μL venöst blod,20 vilket eliminerar farhågor om frekvensen av progenitor-T-celler i kapillärblodprover.
Vi använde denna standardiserade kollaborativa analys med hög genomströmning av SARS-CoV-2 T-celler och IgG-antikroppar baserade på kapillärt helblod för att mäta cellulärt och humoralt immunsvar hos deltagare med olika komorbiditeter och tidigare vaccinations-/infektionsstatus (tabell 1).rekryterades från hela Storbritannien mellan 24 januari och 14 mars 202214. Majoriteten (90,9 %) av fingerproverna erhölls korrekt och skickades till laboratoriet inom 24 timmar efter insamlingen.I vissa fall mottogs prover inom 48 timmar efter blodtagning, men inget av dessa prover klarade kvalitetskontroller och påverkade inte de totala mätningarna av T-celler eller antikroppar (kompletterande fig. 5).Även om det fanns skillnader i storleken på det SARS-CoV-2-specifika IFN-γ+ T-cellsvaret mätt i respektive kapillär- och venösa blodprover hos vissa individer, fanns det inga signifikanta skillnader totalt sett (P = 0,88; kompletterande fig. 6) ).).
SARS-CoV-2-specifika IFN-γ+ T-cellsvar ökade signifikant hos vaccinerade individer som också rapporterade en tidigare infektion (P = 0,0001), men inte signifikant högre än hos tidigare infekterade ovaccinerade donatorindivider (P = 0,19, Fig. 3a).).IgG-svar mot spikglykoprotein (RBD, S1, S2) var signifikant högre hos vaccinerade donatorer än hos ovaccinerade donatorer, oavsett tidigare infektionsstatus (Figur 3b-d).Intressant nog var det genomsnittliga N-bundna IgG-svaret högst hos tidigare infekterade ovaccinerade deltagare jämfört med vaccinerade deltagare, även om detta inte nådde signifikans (Figur 3e).Bland ovaccinerade och oinfekterade donatorer som självdeklarerat var 15 av 37 (40,5 %) deltagare positiva för N-kopplat IgG, över det tidigare fastställda tröskelvärdet på 2,0 BAU/mL14;dessa 15 deltagare Tolv av dessa patienter testade positivt för IFN-γ+ T-cellsvar över det tidigare fastställda tröskelvärdet på 22,7 pg/ml IFN-γ14.Därför är det troligt att dessa deltagare tidigare var infekterade med SARS-CoV-2 och inte testades för covid-19 på grund av personliga val, brist på PCR och/eller utrustning för sidoflöde, eller var asymtomatiska.Även om det fanns en signifikant korrelation mellan T-cellssvar på IFN-γ+ och N-kopplade IgG-nivåer hos ovaccinerade donatorer (P = 0,0044; kompletterande figur, minskade N-länkade IgG-svar snabbare än N-kopplade IgG-svar, medan IFN-γ + T-cellssvar bibehölls oavsett vaccinationsstatus, även om antalet donatorer 50 veckor efter utmaningen var lågt (kompletterande fig. 8). Vaccinationstyp var i allmänhet lite annorlunda i observerade IgG-svar specifika för SARS-CoV-2, T celler och RBD-associerade, även om deltagare som fick två doser av BNT162b2 följt av mRNA1273-revaccination visade signifikant högre nivåer av IFN-γ + T-celler var mer känsliga för SARS-CoV-2 än de som fick två doser av ChAdOx1 och BNT162b2 (kompletterande Fig. 9) Dessutom hade rapporterade samsjukligheter liten övergripande skillnad i observerade T-cellssvar jämfört med friska donatorer (kompletterande fig. 10).
ett SARS-CoV-2-specifikt IFN-γ+ T-cellsvar mättes med kapilläranalys av helblod och baserades på deltagarnas vaccinationer och tidigare SARS-CoV-2-infektionsstatus (bekräftat med PCR och/eller sidoflödestest).'Vac + /Inf +' n = 42 (grön), 'Vac + /Inf-' n = 158 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 33 (gul), 'Vac- /Inf-' n = 37 (grå).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .SARS-CoV-2-specifika IgG-bindningsreaktioner till spikreceptorbindningsdomänen ("RBD") (b; ****P < 0,0001, ns: ej signifikant), spike-subenhet 1 ("S1") (c; * * **P < 0,0001, ns: ej signifikant), spiksubenhet 2 ("S2″) (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016 ) och nukleokapsid ("N") (e; ****P < 0,0001, ns ej signifikant) mättes med hjälp av venös helblodsanalys och baserat på deltagarnas vaccinationer och tidigare SARS-CoV-2 (bekräftat med PCR och/eller sidoflödesanalys) Infektioner delades upp med status.'Vac + /Inf +' n = 46 (grön), 'Vac + /Inf-' n = 182 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 34 (gul), 'Vac-/Inf-' n = 37 (grå).Jämförelser gjordes med Kruskal-Wallis-testet, justerat för flera jämförelser med Dunn-testet.Data visas som diagram (mittlinje vid median, övre gräns vid 75:e percentilen, nedre gräns vid 25:e percentilen) med morrhår vid minimi- och maximivärden.Varje prick representerar en donator.Rådata tillhandahålls i form av rådatafiler.
Som tidigare ombads deltagarna att rapportera positiva PCR- och/eller laterala blodflödesresultat för COVID-19;enligt UK Health Agency antogs deltagarna ha smittats med Omicron-coronaviruset (B.1.1.529) vid testtillfället för den positiva virusvarianten, eftersom den var den dominerande varianten i Storbritannien under studieperioden.Bland 299 utvärderbara donatorer observerade vi en infektionsfrekvens på 8,0 % (24/299) inom tre månader efter kapillärdonation, varav sju inte vaccinerades.Andelen komorbiditeter bland alla deltagare var lägre hos dem som testade positivt för covid-19 (10,7 %) än de som testade negativt för covid-19 (24,4 %, tabell 1), vilket kan bero på att deltagare med vissa sjukdomar är mer försiktiga och skyddar mot potentiella konsekvenser som diabetes och cancer.Som observerats i en kohort av venöst blod, SARS-CoV-2-specifika interferon-γ (IFN-γ)-positiva T-celler mätt i kapillärblodprover från individer som rapporterar ett positivt diagnostiskt test för COVID-19.Svarsstorleken var signifikant lägre än hos oinfekterade donatorer (P = 0,034; figur 4a) på grund av den relativt dåliga induktionen av ett T-cellssvar genom vaccination och/eller tidigare infektion (kompletterande figur 11).På liknande sätt var varken RBD-, S1-, S2-bindande IgG-svar (figur 4b–d) eller RBD-, S1-neutraliserande antikroppssvar specifika för vildtyp eller delta SARS-CoV-2 (B. 1.617).(Kompletterande figur 12).Individer med någon betydande risk för infektion kan identifieras.I motsats till den venösa kohorten, skiljer inte N-relaterade IgG-svar inte heller risken för covid-19 (Figur 4e), vilket tyder på att Omicron-varianten (B.1.1.529) ökar immunförsvaret hos tidigare infekterade individer, som nyligen beskrivits 21. Däremot var styrkan hos det SARS-CoV-2-specifika IFN-γ T-cellsvaret återigen den viktigaste variabeln för att bestämma individuella odds för att testa positivt för COVID-19 (Figur 4f).Totalt sett hade deltagare med ett SARS-CoV-2-specifikt kapillärt T-cellssvar ≤23,7 pg/mL IFN-γ en 14,9 % risk för infektion efter tre månader jämfört med ett svar >141,6 pg/ml.ml IFN.-γ hade en infektionsrisk på 4,4 % (tabell 2).
IFN-γ+ T-cellsvar specifika för SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) och SARS-CoV-2-specifik IgG-riktad receptorbindande domän (“RBD”) (b), spike subenhet 1 (' S1′) (c), spik-subenhet 2 ('S2') (d) och nukleokapsidbindningsreaktion ('N') (e).Deltagare som identifierades som positiva för covid-19-test (PCR och/eller lateralt blodflödestest), alla infektioner inträffade inom 3 månader efter blodprovstagning.Jämförelser gjordes med användning av ett tvåsidigt Mann-Whitney-test.Data visas som diagram (mittlinje vid median, övre gräns vid 75:e percentilen, nedre gräns vid 25:e percentilen) med morrhår vid minimi- och maximivärden.Varje prick representerar en donator.ns är inte viktigt.Värmekartan f visar Spearmans rangkorrelationer mellan variabler för den angivna datamängden.Jämförelser som inte var statistiskt signifikanta exkluderades från matrisen och markerades med tomma celler.Rådata tillhandahålls i form av rådatafiler.
När vi går in i nästa fas av covid-19-pandemin kommer fokus att flyttas från förebyggande till individuell riskhantering och identifiering av sårbara medlemmar i samhället.Att etablera korrelat av immunitet mot COVID-19 är avgörande för att effektivt identifiera och behandla dessa högriskgrupper.Det finns nu allt fler bevis för att T-cellsimmunitet skyddar mot SARS-CoV-2-infektion och begränsar svårighetsgraden av COVID-1910.De data som presenteras här visar att den kombinerade styrkan hos SARS-CoV-2-specifika IFN-γ+ T-cellsvar mot spik-, membran- och nukleokapsidstrukturproteiner ger ett bättre skydd mot COVID-19 än vad antikroppsbindning gör.19 främjar eller neutraliserar svaren. .och bör beaktas vid bedömning av individuell immunitet och/eller flockimmunitet.RNA-virus såsom SARS-CoV-2 eller influensa A-virus (IAV) undviker serologisk neutralisering genom att snabbt utveckla exponerade B-cellsepitoper på ytantigener som känns igen av antikroppar.Det skyddande immunsvaret som tillhandahålls av T-celler kan återspegla inriktningen av epitoper från mer konserverade regioner av virala proteiner som inte snabbt kan undkomma ett immunsvar.T-cellsmedierat skydd mot nya SARS-CoV-2-varianter liknar det heterosubtypiska skyddet som förmedlas av T-cellsinriktning av konserverade inneboende proteiner som ses i IAV22,23-subtyper.
Trots den enorma potentialen för att mäta det cellulära immunsvaret mot COVID-19, har relativt lite uppmärksamhet ägnats åt utvecklingen av korrekta, standardiserade T-cellsanalyser med hög genomströmning.De traditionella komplexiteten och kostnaderna förknippade med att mäta T-cellssvar utesluter en exakt bestämning av T-cellsimmunitet vid screening för immunitet med stor population.Medan flera kommersiella helblodspeptidstimuleringsanalyser nyligen har blivit tillgängliga, kräver alla för närvarande en phlebotomist för att få blod, vilket begränsar tillgängligheten och skalan.Kapillärblodsystem används i stor utsträckning för att bestämma prevalensen av SARS-CoV-2-antikroppar i en population.Vi anpassade kapillärblodanalyser för att utföra helblodspeptidstimuleringsanalyser för att bedöma T-cellsreaktivitet mot SARS-CoV-2-strukturproteiner och SARS-CoV-2-specifika antikroppssvar.Faktum är att den kombinerade mätningen av SARS-CoV-2-specifika antikroppar och T-celler i samma kapillärblodprov är mycket attraktiv: (i) minskar behovet av flera blodprov per deltagare, (ii) förbättrar deltagarnas erfarenhet och förståelse;(iii) förbättra logistiken och minska dubbelarbete, (iv) minska miljöpåverkan eftersom mindre laboratorieförbrukningsmaterial och provleverans krävs.Även om den totala IFN-y-reaktiviteten var likartad mellan matchade venösa och kapillära blodprover, observerades den vara lägre i den kapillära blodkohorten av deltagarna (fig. 4a) jämfört med den venösa blodkohorten (fig. 2a).IFN-γ-värden Det finns flera förklaringar till detta fynd, nämligen ett stort antal deltagare med komorbiditeter som kräver immunsuppressiv terapi rekryterades till den kapillära blodprovskohorten (tabell 1) och viabilitet och/eller funktion hos T-celler erhållna från vaskulära prover kan vara låga, särskilt med hänsyn till villkoren för långtidslagring av prover före peptidstimulering.
Det för närvarande allmänt tillgängliga COVID-19-vaccinet ger det bästa skyddet mot allvarlig sjukdom för de flesta mottagare inom 6 månader efter vaccination8.Uppmuntrande nog, trots den dåliga vaccininducerade serologiska neutraliseringen av SARS-CoV-26,7-varianter, förblev T-cellssvar som framkallades av vaccination mot vildtyp SARS-CoV-2 mycket reaktiva, eftersom 25 andra dök upp.De data vi presenterar här visar vikten av en bredare bedömning av vaccinets immunogenicitet, och lyfter fram vacciner med otillräcklig T-cellsimmunitet för att förhindra plötslig infektion och ihållande överföring av viruset.Vi observerade också att många ovaccinerade individer som rekryterats till kapillärkohorten hade ett signifikant svar av SARS-CoV-2-specifika T-celler (och N-bindande IgG) oavsett tidigare vaccination, vilket troligen beror på tidigare infektion.Istället för att vaccinera lämpliga individer bör deras risk för infektion bedömas utifrån deras nuvarande immuniseringsstatus och de välgrundade val som görs.
Begränsningar för denna studie inkluderar försäkran om att deltagarna självrapporterade infektion med SARS-CoV-2 efter blodinsamling för att fastställa relevansen av immunitet;vissa deltagare kan ha asymtomatisk infektion och kan inte genomgå PCR och/eller lateralt flödestest för covid-19.Vår datauppsättning saknade också information om deltagarnas mediciner vid tidpunkten för blodprovstagning.Dessutom, med tanke på att alla våra deltagare rapporterade endast milda/måttliga symtom eller inga symtom, var det inte möjligt att identifiera immunsvar från vår datauppsättning som förutspådde en ökad risk för allvarlig sjukdom och sjukhusvistelse för covid-19.Emellertid har närvaron av CD8+ T-cellssvar mot nukleokapsidspecifika epitoper nyligen associerats med skydd mot allvarlig COVID-1926.Dessutom mätte analysen som används här inte T-cellssvar på specifika tidigt uttryckta SARS-CoV-2 icke-strukturella proteiner som nyligen har visat sig preferentiellt ackumuleras hos seronegativa vårdpersonal som har varit i kontakt med infekterade patienter.Baserat på detta arbete, med tanke på förekomsten av samhällsöverföring vid tidpunkten för rekryteringen och den höga sannolikheten för kontaktinfektion i befolkningen, verkar antalet SARS-CoV-2-specifika T-celler som hittats i våra tester också kunna elimineras.subkliniska infektioner i våra kohorter.Slutligen mätte vi inte interleukin 2-produktion av T-celler eftersom vårt tidigare arbete visade dålig identifiering av SARS-CoV-214-specifika T-cellssvar, även om IL-2-specifika svar kan indikera redan existerande korsreaktivitet.celler associerade med försvar mot SARS-CoV-211-infektion.
Sammantaget belyser dessa data det grundläggande behovet av långsiktiga longitudinella studier som införlivar SARS-CoV-2-specifika T-cellsvar i mått på immunitet i populationsskala.Dessa ansträngningar kan få hjälp av utvecklingen av ett nytt kapillärt blodprov som mäter T-cellssvar.
Forskningsprojektet rekryterade deltagare från februari 2021 till mars 2022. Kohorten av friska donatorer (n = 148) som donerade venösa blodprover bestod i första hand av universitetspersonal och studenter som deltog i Cardiff Universitys COVID-19-screeningtjänst eller personal vid en grundskola i Cardiff.Alla deltagare var i övrigt friska och rapporterade inte att de tog några immunsuppressiva läkemedel (se tabell 1 för egenskaper).Kohorten av deltagare som donerade kapillärblodprover inkluderade alla frivilliga donatorer (i åldern 18+) från hela Storbritannien.Mellan 24 januari och 14 mars 2022 var 342 deltagare inskrivna i studien, av vilka 299 lämnade in blodprover till laboratoriet.Många deltagare förblev ovaccinerade och/eller rapporterade allvarliga komorbiditeter, inklusive autoimmuna sjukdomar och cancer (se tabell 1 för egenskaper).Denna studie fick etiskt godkännande från Newcastle och North Tyneside 2 forskningsetiska kommitté (ID IRAS: 294246) och Cardiff University School of Medicine Research Ethics Committee (SREC ref: SMREC 21/01).Alla deltagare gav skriftligt informerat samtycke innan inkluderingen.Deltagarna fick ingen ersättning för att ha deltagit i denna studie.
Venösa blodprov togs genom venpunktion i 6 eller 10 ml litium- eller natriumheparinvakutainer (BD).Kapillärblodprov togs med en fingerlansett och samlades sedan upp i heparinmikrobehållare (BD).Minst 400 µl blod krävs;varje prov som är mindre än detta belopp kommer att avvisas.Andra orsaker till provavstötning inkluderade massiv koagulering och/eller hemolys och misslyckande med att samla upp viskös plasma för analys (kompletterande fig. 5).Totalt fanns 299 kapillärblodprover tillgängliga för att bedöma antikroppssvar, varav 270 prover också var tillgängliga för att bedöma T-cellssvar.
SARS-CoV-2-specifika T-cellssvar utvärderades med hjälp av COVID-19 Immuno-T-analysen (ImmunoServ Ltd) och utfördes som tidigare beskrivits14.Kortfattat togs en 6 ml eller 10 ml natriumheparin (BD) venös vacutainer från varje deltagare och bearbetades i laboratoriet inom 12 timmar efter blodinsamling.Även om de flesta prover bearbetades inom 24 timmar, togs ett 400–600 μl hepariniserat mikroblödande (BD) kapillärblod inom 48 timmar efter fingersticksprovtagning.Venösa och/eller kapillära blodprover stimulerades med separata peptidpooler specifika för SARS-CoV-2 (vildtypsvariant) som tidigare beskrivits14.Detta peptidbibliotek innehåller 420 15-mersekvenser med 11 överlappande aminosyror som spänner över hela spikproteinet (S1 och S2) (S; NCBI-protein: QHD43416 1), nukleokapsidfosfoprotein (NP; NCBI-protein: QHD43423 2) och membran (Mglycoprotein) ; NCBI-protein: QHD43419 1) kodande sekvenser (refererad till som "S-/NP-/M-kombinatoriskt peptidbibliotek").Alla peptider renades till >70%, löstes i sterilt vatten och användes i en slutlig koncentration av 0,5 μg/ml per peptid.Prover inkuberades vid 37°C under 20-24 timmar.Rören centrifugerades sedan vid 5000 xg under 3 minuter och ~150 µl plasma samlades upp från toppen av varje blodprov.Förvara plasmaprover vid -20 °C i upp till en månad innan du kör cytokin-/antikroppsdetektionsanalyser.
IFN-y mättes med hjälp av IFN-y ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, katalognummer 430116) och utfördes enligt tillverkarens instruktioner.Omedelbart efter att stopplösning (2N H2SO4) tillsatts, avlästes mikroplattan vid 450 nm med användning av en BioLegend Mini ELISA-plattläsare.IFN-y kvantifierades genom standardkurveextrapolering med användning av GraphPad Prism.Värden under analysens nedre detektionsgräns registrerades som 7,8 pg/ml, värden över den övre detektionsgränsen för analysen registrerades som 1000 pg/ml.
Anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG-antikroppar mättes med hjälp av en Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex panel (Bio-Rad, kat.nr 12014634) och märktes enl. tillverkarens instruktioner.instruktioner.Prover som rapporterade värden över kvantifieringsgränsen analyserades om vid en utspädning på 1:1000.Den genomsnittliga fluorescensintensiteten för pärlorna mättes på ett Bio-Plex 200-instrument (Bio-Rad).Antikroppskoncentrationer beräknades med VIROTROL SARS-CoV-2 singelkontrollanalysen (Bio-Rad) och omvandlades till WHO/NIBSC 20/136 International Reference Standard Units (BAU/mL) med hjälp av tillverkarens kalibreringsfaktor.
RBD- och S1-subenhetsspecifika neutraliserande antikroppar mot SARS-CoV-2 vildtyp och delta (B.1.617) SARS-CoV-2-linjer mättes med hjälp av Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio) -Rad , art.nr 12016897), enligt tillverkarens instruktioner.Mät den genomsnittliga fluorescensintensiteten på Bio-Plex 200 (Bio-Rad) och beräkna procentuell hämning (dvs neutralisering) med hjälp av följande formel:
Infektiösa neutraliseringsanalyser för SARS-CoV-2 utfördes som tidigare beskrivits28.Kortfattat inkuberades 600 PFU av vildtyp SARS-CoV-2 med 3-faldiga serieutspädningar av plasma i duplikat under 1 timme vid 37°C.Blandningen sattes sedan till VeroE6-celler under 48 timmar.Monoskikt fixerades med 4 % paraformaldehyd, permeabiliserades med 0,5 % NP-40 och inkuberades under 1 timme i blockerande buffert (PBS innehållande 0,1 % tween och 3 % skummjölk).Primär antikropp (anti-nukleokapsid 1C7, Stratech) sattes till blockeringsbuffert under 1 timme vid rumstemperatur.Efter tvätt sattes en sekundär antikropp (anti-mus IgG-HRP, Pierce) till blockeringsbuffert under 1 timme.Monolager tvättades, framkallades med Sigmafast OPD och lästes av på en Clariostar Omega plattläsare.Brunnar utan virus, utan virus men utan antikroppar och normaliserade sera som uppvisade intermediär aktivitet inkluderades i varje experiment som kontroller.
Statistisk analys utfördes i GraphPad Prism (version 9.4.1).Normaliteten hos datamängden testades med Shapiro-Wilk-testet.Icke-parametriska kriterier användes för alla jämförelser.Mann-Whitney-testet användes för oparade prover.Alla tester var tvåsidiga med en nominell signifikans-tröskel på P ≤ 0,05.
Den första utforskande analysen av datamängden gjordes i R (version 4.0.3).Detta inkluderar utvecklingen av Spearmans univariata rangkorrelationsmatris, där korrelationen mellan två variabler representeras av kvadraternas storlek och färg.Statistisk signifikans mellan associationer beräknades med Spearmans rho, där värden ≤0,05 ansågs signifikanta.Jämförelser som inte var statistiskt signifikanta exkluderades från matrisen och markerades med tomma celler.P-värden justerades för flera jämförelser med Holms korrigering.En binär logistisk regressionsmodell användes för att simulera effekten av variabler i datamängden på positiv respons på COVID-19.IFN-y T-cellsvar och anti-RBD/S1/S2/N IgG-titerpoäng omvandlades till faktorer, där varje individ tilldelades lämplig kvartil för varje poäng.Därefter utvecklades en första forskningsmodell med glm-funktionen i statistikpaketet (V4.0.3).Oddskvoterna som härleddes från denna ursprungliga modell extraherades från koefficienterna för modellen med hjälp av funktionen 'odds_plot' i OddsPlotty-paketet (V1.0.2).När vi utvecklade korsvalideringsmodellen använde vi funktionen "bestglm" från bestglm-paketet (V0.37.3) för att begränsa användarbias och säkerställa att den bästa underuppsättningen av prediktorer kan väljas.Metoden som valdes var "uttömmande" och informationskriteriet som användes för att bedöma modellanpassning var AIC.Samma arbetsflöde som beskrivs ovan användes för att erhålla oddskvoten.
För mer information om studiedesign, se Nature study abstract länkat till den här artikeln.
Brev och förfrågningar om material ska riktas till Dr. Martin Scarr eller professor Andrew Godkin.Den här artikeln innehåller de ursprungliga uppgifterna.
R-koden som används för att skapa statistiska modeller är allmänt tillgänglig utan begäran29.Omtrycksinformation och licenser finns på www.nature.com/reprints.
Munro, APS et al.Säkerhet och immunogenicitet för sju COVID-19-vacciner som en tredje dos (booster) efter två doser av ChAdOx1 nCov-19 eller BNT162b2 (COV-BOOST) i Storbritannien: en fas 2, blindad, multicenter, randomiserad, kontrollerad studie.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Immunogenicitet, säkerhet och reaktogenicitet av heterolog primärvaccination mot COVID-19 (Com-COV2) med hjälp av mRNA, virala vektorer och proteinadjuvansvacciner i Storbritannien: en fas 2, enkelblind, randomiserad studie, non-inferiority test.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB et al.Effekten av covid-19-vacciner hos immunsupprimerade patienter: en systematisk översyn och metaanalys.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Minskad neutralisering av SARS-CoV-2 mikron variant B.1.1.529 av serum efter immunisering.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y och Baliser RD Genombrottsinfektion hos SARS-CoV-2-vaccinerade individer: mätning, orsaker och konsekvenser.National Priest of Immunology.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Försvagat humoralt immunsvar mot BNT162b2 Covid-19-vaccin under 6 månader.N. eng.J. Medicin.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Aktivitet hos konvalescent- och vaccinsera mot SARS-CoV-2 Omicron.Nature 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Skyddstid för Qatars mRNA-vaccin mot SARS-CoV-2 Omicron BA.1 och BA.2 subvarianter.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ et al.Minnes B-cellsfrekvens minskar med genombrottsinfektion av covid-19 deltavaccin.Molekylär medicin EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et al.Korsreaktiva minnes-T-celler är associerade med att skydda COVID-19-kontakter från SARS-CoV-2-infektion.Nationell kommun.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Distinkta SARS CoV-2 omikronreaktiva T-cells- och B-cellssvar hos covid-19-vaccinmottagare.vetenskapen.Immunologi.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.Ärvda SARS-CoV-2-specifika T-celler korsigenkänner Omicron-varianter.Nationell medicin.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ et al.Mätning av SARS-CoV-2-specifika T-celler från helblod avslöjar asymtomatisk infektion och vaccinimmunogenicitet hos friska individer och patienter med solid organcancer Immunologi https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT et al.Snabb mätning av SARS-CoV-2 spike T-celler i helblod från vaccinerade och naturligt infekterade individer.J. Clinical.investera.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.COVID-19-vaccinsvar hos patienter med multipel skleros.Installera.Neuroner.91, 89–100 (2022).
Bradley RE et al.Ihållande COVID-19-infektion med Wiskott-Aldrichs syndrom försvann efter terapeutisk vaccination: en fallrapport.J. Clinical.Immunologi.42, 32–35 (2022).